Pubblicazioni

Autori:

Channa Vajjhala, Sarath

Titolo:

Urinary exosomal miRNAs in hypertension: methodological advancements and potential applications for biomarker discovery

Anno:

2014

Tipologia prodotto:

Doctoral Thesis

Tipologia ANVUR:

Altro

Lingua:

Inglese

Parole chiave:

urinary exosomes; miRNA; hypertension

Abstract (italiano):

Introduzione: Gli esosomi sono vescicole contenenti citoplasma rilasciate da molti tipi cellulari e che possono essere rinvenute in molti fluidi biologici, urine incluse. Gli esosomi urinari derivano dalle cellule epiteliali del tubulo renale e possono essere rilasciati da ogni segmento del nefrone. Gli esosomi urinari contengono constitutivamente RNA (piccoli RNA, microRNA ed mRNA) e possiedono un subset peculiare di proteine. I microRNA (microRNAs) sono piccole (20-22 nucleotidi) molecole di RNA endogeno non codificante che modulano l’espressione genica. I miRNA modulano meccanismi regolatori che influenzano processi cellulari fondamentali come la differenziazione, la proliferazione, la morte e il metabolismo cellulare e la fisiopatologia di molte malattie. Il potenziale dei miRNA come biomarcatori diagnostici è stato recentemente dimostrato in una grande varietà di patologie. Lo scopo della presente ricerca si è focalizzato in modo selettivo sul possibile ruolo dei miRNA nell’ipertensione umana, in particolare su una specifica forma di ipertensione secondaria, l’aldosteronismo primario (PA). PA è la causa principale di ipertensione arteriosa secondaria, con una prevalenza stimata che varia dal 10 al 15% nella popolazione afferente a centri di ipertensione specialistici. Una diagnosi corretta di PA richiede il campionamento venoso surrenalico (AVS) per la classificazione del sottotipo (adenoma secernente aldosterone, APA oppure iperplasia surrenalica bilaterale, BAH). Dal momento che questo tipo di test non è facilmente praticabile, è invasivo e richiede capacità specifiche dei radiologi interventisti, l’identificazione di biomarcatori appropriati e specialmente non invasivi per la definizione del sottotipo è altamente auspicabile. Questa necessità pratica è direttamente proporzionale alla crescente riscontro di pazienti affetti da PA. Per i suddetti motivi, la nostra ipotesi di lavoro è stata quella di identificare miRNA aventi una valenza diagnostica e/o prognostica negli esosomi urinari di pazienti con PA . Gli obiettivi di questo studio erano molti e possono essere riassunti come segue: i) definire il protocollo ottimale per isolare, purificare e validare gli esosomi dalle urine, ii) delineare il protocollo ottimale per una analisi su larga scala dei miRNA esosomiali, iii) analizzare i profili di espressione in sottogruppi di pazienti PA (APA e BAH) e con ipertensione essenziale (EH), e iv) studiare negli esosomi urinari l’abbondanza di alcune proteine note per essere associate ad un anomalo trasporto del sodio a livello del tubulo renale in corso di malattia.. Metodi: Gli esosomi urinari sono stati isolati usando tecniche di ultrafiltrazione, ultracentrifugazione ed il reagente ExoQuick-TC™. La caratterizzazione delle vescicole purificate è stata ottenuta attraverso analisi con “dynamic light scattering” per la determinazione della dimensione e con Western Immunoblotting per la determinazione del marcatore esosomiale Acquaporina 2 (AQP2). Allo scopo di ottimizzare il protocollo di purificazione dei miRNA dagli esosomi urinari, abbiamo paragonato i tre diversi metodi per l’isolamento degli esosomi urinari e le tecniche di estrazione dell’RNA. La resa, la dimensione e la qualità dell’ RNA esosomiale è stata valutata rispettivamente mediante colorante fluorescente, elettroforesi capillare e parametri spettrofotometrici. La valutazione della presenza e dell’abbondanza dei miRNA è stata ottenuta attraverso analisi con RT-qPCR. Lo studio dei profili di espressione dei miRNA da esosomi urinari è stato eseguito su un totale di 12 campioni (gruppo test: 4APA, 4BAH e 4 EH). I profili di espressione ottenuti con cartucce microfluidiche “TaqMan™ human Low density array (A&B)” sono stati valutati allo scopo di identificare diversi profili di miRNA. I miRNA con livelli di espressione significativamente diversi tra i vari gruppi sperimentali (APA,BAH ed EH) sono stati validati at

Id prodotto:

80689

Handle IRIS:

11562/710763

depositato il:

18 aprile 2014

ultima modifica:

4 novembre 2022

Citazione bibliografica:

Channa Vajjhala, Sarath, Urinary exosomal miRNAs in hypertension: methodological advancements and potential applications for biomarker discovery

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